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Material und Methoden

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Kontamination schützen. Die Enzyme werden aus in heißen Quellen lebenden

Bakterien gewonnen. Wichtigster Vertreter dieser Emzymklasse ist die aus dem

thermophilen Bakterium Thermus aquaticus stammende Taq-Polymerase.

2.4.2 Material

2.4.2.1 Geräte

•

GeneAmp® PCR System 2400 (Fa. Perkin Elmer, Ueberlingen)

•

GeneAmp® PCR System 9600 (Fa. Perkin Elmer, Ueberlingen)

•

MikroAmp™ Reaction Tubes Kat. Nr. N801-0540 (Fa. Perkin Elmer,

Ueberlingen)

•

MikroAmp™ Base Kat. Nr. N801-5531 (Fa. Perkin Elmer, Ueberlingen)

•

MikroAmp™ Tray/Retainer Assembly Kat. Nr. N801-5530 (Fa. Perkin Elmer,

Ueberlingen)

2.4.2.2 Chemikalien

•

Taq DNA Polymerase Kat. Nr. D1806 (Fa. Sigma, Taufkirchen)

•

10x Reaction Buffer Kat. Nr. P2192 (Fa. Sigma, Taufkirchen) (100 mM Tris-

HCl, pH 8,3, 500 mM KCl, 15 mM MgCl

, 0,01% Gelatine)

•

Polymerization Mix Kat. Nr. 27-2094-01 (Fa. Pharmacia Biotech,

Uppsala/Schweden) (20mM dNTP)

•

Oligonukleotid-Primer (Fa. Life Technologies, Eggstein)

•

DEPC-H

2.4.3 Durchführung

Die für die PCR benötigten synthetischen Primer wurden im Vorfeld der Arbeit

erworben. Die Sequenz kann entweder aus Publikationen entnommen oder mit

Hilfe von DNA-Sequenzen selbst entwickelt werden (Sequenzen siehe Tabelle

3.1 und 3.4). Der Forward-Primer besteht aus einer antegraden DNA-Sequenz

des Forward-Stranges im 5`-Bereich des zu amplifizierenden DNA-Abschnittes,

1 2 ... 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 ... 130 131

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