Wolf K45E Manual do Utilizador descarregar pdf (Página 34)

Material und Methoden

_____________________________________________________________________________________

beeinflussen die Laufgeschwindigkeit maßgeblich.

2.5.2 Material

2.5.2.1 Geräte

•

Elektrophoresekammer (Fa. MWG-Biotech)

2.5.2.2 Materialien

•

Qualex-Gold-Agarose (Fa. AGS GmbH, Heidelberg)

•

TAE-Puffer 1x

•

DEPC-H

•

Loading buffer 6x (Fa. Pharmacia Biotech, Uppsala/Schweden)

•

100 Base-pair Ladder-Lösung (Fa. Pharmacia Biotech, Uppsala/Schweden)

•

Ethidiumbromid

2.5.3 Durchführung

Zur Auswertung des PCR-Produktes wird zunächst ein Agarose-Gel mit einer

Konzentration von 1,2% in TAE-Puffer 1x gegossen und zum Aushärten

beiseite gestellt. Die Elektrophoresekammer wird ebenfalls mit TAE-Puffer 1x

so weit gefüllt, dass das Gel vollständig von Puffer bedeckt wird. Nun pipettiert

PDQ  O GHV 3&53URGXNWHV  O /RDGLQJ EXIIHU [ XQG  O '(3&+

zusammen und beschickt damit die Taschen des mittlerweile ausgehärteten

und in Puffer eingetauchten Agarose-Gels. Der mitgeführte Standard (100

Base-pair Ladder-Lösung) dient später der Ermittlung der Fragmentlängen, die

ebenfalls mitgeführte Negativ-Kontrolle dem Ausschluss einer Kontamination.

Der hinzugefügte Farbstoffpuffer gibt eine grobe Orientierung über die

zurückgelegte Laufstrecke. Das Gel wird an die Spannungsquelle

angeschlossen und man lässt die DNA für ca. 1 Stunde bei 100V und 100mA

wandern.

1 2 ... 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 ... 130 131

Sem comentários

Wolf K45E Manual do Utilizador Página 34