Wolf K45E Manual do Utilizador descarregar pdf (Página 49)

Ergebnisse

_____________________________________________________________________________________

3 Ergebnisse

3.1 Mutationsanalyse

3.1.1 Untersuchung des ROMK-Gens (

KCNJ1

)

3.1.1.1 Allgemeines

Dieses Gen wurde bei allen Patienten untersucht, ausgenommen denen, bei

denen eine Mutation im ClC-Kb gefunden wurde.

Die SSCP-Analysen wurden bei zwei Temperaturen (4 und 15°C) durchgeführt,

um die Sensitivität der Methode zu erhöhen. Untersucht wurden sämtliche

Exone des ROMK, d.h. die Exone 1 – 4 und das Exon 5, unterteilt in 6 PCR-

Fragmente. Obwohl die Exone 1 und 3 keine kodierenden Sequenzen

enthalten, weiß man inzwischen, dass insbesondere das Exon 1

Transskriptionselemente enthält, welche für die Bildung der Isoformen 2-5 von

entscheidender Bedeutung sind (Näheres siehe Abschnitt 4.1). Daher ist es

möglich, dass eine Mutation in diesem Bereich ebenfalls zu einer Veränderung

Tabelle 3.1

Primer Sequenzen für die SSCP-Analyse im ROMK-Gen (5`-3`)

Primer Name Exon Forward-Primer Reverse-Primer

ROMK Ex 1 1 CACGCCTACTCTTGTTGGAT CGTGGAAAAGAGGTCTAAAT

ROMK Ex 2 2 TTACCTTCACCCAAATGTCTT CGTCTATGCACCAAATCTGT

ROMK Ex 3 3 GTGGGCCTGTCCTCTGTCTC AGCCTGGGGTGTCCAATAGT

ROMK Ex 4 4 CACAAATTAGCGTCAGTCCAC AACATTATCTGCCTGGCTTTC

ROMK Ex 5.1 5 GCTACCGTTTTGCTCCCATA GACTTTGCTTTACTCCCGTTG

ROMK Ex 5.2 5 CTTATTGGCAGTCACATTTAT TATTTCCCTTCCTTTGTCTT

ROMK Ex 5.3 5 GGATATGGATTCAGGTGTGTG TTCAGGAGTGACTGTGGTCTT

ROMK Ex 5.4 5 AAGTGGAGATACAAAATGACCA AAGCAGAAAAATGGCAGTG

ROMK Ex 5.5 5 ATCAGGGTGTTGACAGAAA GGAGGTCTTTGTGAATGTA

ROMK Ex 5.05 5 TTCATGTGGGTCACCTAGTTC CCTCCACATTGCCAAATTCT

1 2 ... 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 ... 130 131

Sem comentários

Wolf K45E Manual do Utilizador Página 49