Wolf K45E Manual do Utilizador Página 42

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Material und Methoden
_____________________________________________________________________________________
35
dass sie mit der PCR-Reaktion selbst nicht interferieren.
In der zweiten so
genannten Cycle-
Reaktion entstehen
durch sich wieder-
holende Denaturie-
rungs- und Elonga-
tionsschritte DNA-
Fragmente, deren
Länge durch den
Einbau eines modifi-
zierten Nukleosidtri-
phosphats determi-
niert sind. Diese
Nukleosidtriphospha
te tragen an ihrer 3`-
Position anstelle der
üblichen OH-Grup-
pe (so genannte
D
i-
d
esoxy
n
ukleosid
t
ri-
p
hosphate, ddNTP)
lediglich ein H-
Atom. Dieses macht
eine Kettenverlän-
gerung unmöglich,
da die Bildung der
notwendigen Phos-
phorsäureester von
dem Vorhandensein
einer 3`-OH-Gruppe
abhängt.
im SSCP auffällige DNA-Probe
3`
5`
5`
3`
DNA-Polymerase
Fluoreszenz-Primer
dATP, dCTP, dGTP, dTTP
PCR
Sequenzierung
ddGTP
ddTTP
ddCTP
ddATP
Cycle-Sequencing
Abbildung 2.5
Sequenzierung - schematische Darstellung des
Funktionsprinzips
A
C
G
T
GATCACGTACTGGAC
GATCACGTACTGGA
GATCACGTACTGG
GATCACGTACTG
GATCACGTACT
GATCACGTAC
GATCACGTA
GATCACGT
GATCACG
GATCAC
GATCA
GATC
GAT
GA
G
Laufrichtung
Ableserichtung
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